Metode One Broth One Plate adalah metode alternatif yang dikembangkan oleh Neogen® untuk mendeteksi bakteri patogen Salmonella dan Listeria dalam sampel makanan dan lingkungan. Metode ini memungkinkan pengguna untuk mendapatkan hasil yang akurat dalam waktu 48 jam hanya dengan 1 plate agar dan 1 enrichment broth.

Metode ini telah tervalidasi dan disertifikasi secara independen sesuai dengan ISO 16140-2 sebagai metode alternatif untuk standar ISO 11290-1 dan ISO 6579.

Alur kerja OBOP for Salmonella (OBOP-S) juga memiliki sertifikasi MicroVal (Cert. No. 2019LR88) dan AOAC (RI PTM 102002) sebagai metode alternatif dari metode referensi FDA BAM dan USDA MLG. Sedangkan, metode OBOP for Listeria (OBOP-L) telah tervalidasi AFNOR NF Certification (NEO35/05-07/16 NEO35/06-07/16).

Prosedur pengujian OBOP for Salmonella:

Enrichment sampel

1. Encerkan sampel 1:10. x g atau x mL sampel dalam 9 X x mL Buffered Peptone Water HQ (ISO).

2. Homogenisasi dalam stomacher bag.

3. Tambahkan x g (atau x mL) X 0,04 mL Salmonella Selective Supplement yang sudah diencerkan. Misal, 1 mL Salmonella Selective Supplement setiap 25 g sampel + 225 mL BPW.

4. Homogenisasi dan inkubasi pada 41.5±1°C selama 18±2 jam.

Isolasi koloni Salmonella

1. Gunakan loop inokulasi steril untuk isolasi bakteri Salmonella dari enrichment broth (tahap 4 dari enrichment) ke permukaan CASE agar dengan teknik inokulasi 4 kuadran (Gambar 1).

2. Inkubasi CASE agar plate pada suhu 34-38°C selama 24±3 jam.

Interpretasi dan Konfirmasi 

Koloni biru/hijau yang tumbuh pada CASE agar plate merupakan presumptive positive Salmonella dan dapat dikonfirmasi menggunakan Salmonella Latex test (Microgen F42 or OXOID) atau metode ISO 16140-6.

Prosedur pengujian OBOP for Listeria:

Enrichment sampel

1. Encerkan sampel 1:10. x g atau x mL sampel dalam 9 X x mL LESS Plus Broth

2. Homogenisasi dalam stomacher bag

3. Inkubasi pada suhu 30±1°C selama 25±3 jam (untuk Listeria spp.) atau selama 27±3 jam (untuk Listeria monocytogenes).

Isolasi koloni Listeria

1. Gunakan loop inokulasi steril untuk isolasi bakteri Listeria dari enrichment broth (tahap 3 dari enrichment) ke permukaan Listeria chromogenic agar O&A (untuk deteksi Listeria spp. dan Listeria monocytogenes) atau ke permukaan PALCAM agar (untuk deteksi Listeria spp. saja) dengan teknik inokulasi 4 kuadran (Gambar 1).

2. Inkubasi agar plate pada suhu 37±2°C selama 24 jam (s/d 48 jam untuk PALCAM agar).

Interpretasi dan Konfirmasi 

Koloni biru/hijau yang tumbuh merupakan presumptive positive Listeria spp. dan dapat dikonfirmasi menggunakan metode standar CEN atau ISO (uji utilisasi karbohidrat setelah subkultur pada blood agar, diikuti dengan haemolytic test) atau metode ISO 16140-6.